Fundamento
Para el tratamiento de las mamitis y
otros procesos infecciosos se administran a los animales un amplio rango de
medicamentos con efecto bactericida, como la penicilina G, ampicilina, tetraciclinas
y sulfamidas. Estas sustancias antimicrobianas pueden llegar a la leche por los
tratamientos que se aplican vía intramamaria, a través de alimentos
medicamentosos y por el uso inadecuado de medicamentos administrados intramuscularmente.
La presencia de residuos de sustancias antibacterianas en la leche plantea
problemas sanitarios por dos razones:
· Por constituir un riesgo sanitario
para el consumidor, pudiendo aparecer los siguientes efectos: reacciones
alérgicas en personas sensibles, reacciones de carcinogenicidad si la
exposición es prolongada, y desarrollo de microorganismos resistentes a los antibióticos.
· Por ser un problema tecnológico al
interferir en el crecimiento de los cultivos iniciadores utilizados en la preparación
de productos lácteos como el queso y las leches fermentadas.
Para la determinación de antibióticos
en leche se utiliza el Kit de detección semicuantitativo basado en técnicas
microbiológicas. El principio de esta técnica se basa en añadir una muestra de
leche a un agar que contengan un indicador de pH y esporas de Bacillus steraothermophilus
var. cardiolactis. El medio de cultivo es inicialmente púrpura, y tras el crecimiento
de los microorganismos, durante un periodo de incubación y en presencia de la leche,
se producen cambios en el medio que van acompañados de la producción de ácido y
de una disminución del pH. Como respuesta a este cambio del pH el indicador
vira de púrpura a amarillo poniendo en evidencia el crecimiento del
microorganismo y la ausencia de sustancias antibacterianas. Si por el contrario
el medio se mantiene púrpura tras la incubación, sospecharemos de la presencia
de antibióticos que inhibirían en crecimiento de los microorganismos.
Materiales y
Reactivos
· Kit de detección de antibióticos en
leche CHR Hansen (500145 Copan Test P&S)
Procedimiento
· Tomar una muestra de leche de un
volumen de 100 μl con la pipeta d del kit y adicionar en uno de los tubos
preparados para el ensayo. Tener la precaución de utilizar una pipeta nueva
para cada muestra.
· Colocar el tubo en una estufa o baño
maría a 64±1ºC e incubar.
· Leer los resultados en el cambio de
color del medio de cultivo cuando ha transcurrido el tiempo de incubación (3
horas).
· Las muestras deben ser ensayadas
paralelamente con un control positivo constituido por una solución patrón de
penicilina con una concentración de 0.004 μg/ml (0.0067 UI/ml), y con otro
control negativo que será leche desnatada en polvo sin sustancias antimicrobianas.
Interpretación
El kit semicuantitativo permite detectar la
presencia de sustancias antibacterianas en leche cuando se encuentran en
concentraciones superiores a los Límites Máximos Residuales (LMR) de acuerdo a
los cambios de color que se observan en el medio de cultivo.
Para interpretar los resultados
obtenidos tendremos en cuenta las variaciones de color de la muestra problema,
del control negativo y del control positivo, tal y como se muestra en el siguiente cuadro:
Los resultados serán positivos siempre
que las sustancias antibacterianas se encuentren por encima de las
concentraciones indicadas a continuación:
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